Optimeringsstudie om nedströms reningsprocess av kycklingembryoskördebuljong för typ IV influensavirus (Del 2)

Effekterna av olika ultrafiltreringskoncentrationsprocesser på kvaliteten på klarad vätska från typ IV influensavirus

Influensaviruskoncentratet har en stor volym, låg hemagglutininhalt och höga halter av föroreningar och proteiner, vilket kräver ultrafiltreringskoncentration innan efterföljande bearbetning. Ultrafiltrering är en föredragen metod för mild, stor-produktionskoncentration. Studier har visat att ett 750kd hålfibersystem avsevärt kan minska ovalbuminhalten i koncentratet, medan en annan studie indikerar att ett 1000kd membraninkapslingssystem avsevärt kan minska föroreningarna och proteinerna i fågelinfluensakoncentrat. Efter att ha granskat omfattande litteratur och jämfört två vanligt använda ultrafiltreringskoncentreringsanordningar, 750kd hålfibersystemet och 1000kd membraninkapslingssystemet, med alla förhållanden identiska förutom operativsystemet, bestämdes den optimala ultrafiltreringskoncentrationsprocessen baserat på testresultaten.

Testresultaten visas i figur 4-9. UA1-1 representerar medelvärdet av tre satser av ultrafiltreringskoncentrat som filtrerats med ett 750 kd hålfibersystem, UA1-2 representerar genomsnittet av tre satser av ultrafiltreringskoncentrat som filtrerats med ett 1000 kd membransystem, och så vidare.

Figur 4. Detektionsresultat av influensaviruskoncentrat - totalt proteininnehåll

Figur 5. Detektionsresultat av influensaviruskoncentrat - ovalbumininnehåll

Figur 6. Detektionsresultat av influensaviruskoncentrat - total proteinborttagningshastighet

Figur 7. Detektionsresultat av influensaviruskoncentrat - hemagglutinationstiter

Figur 8. Detektionsresultat av influensaviruskoncentrat - koncentrationstiterutbyte

Figur 9. Detektionsresultat av influensaviruskoncentrat - hemagglutinininnehåll

 

Resultaten visade att de bakteriella endotoxinnivåerna i alla grupper av influensaviruskoncentratet var under 60 EU/ml. Det fanns inga statistiskt signifikanta skillnader i ovalbuminhalt, hemagglutinationstiter, hemagglutininhalt och koncentrationstiterutbyte, vilket kan vara relaterat till influensavirusets struktur. Behandling med 1000 kDa membransystemet visade dock en minskning av det totala proteininnehållet i influensa V- och BY-stammar, såväl som en minskning av den totala proteinavlägsnandehastigheten för influensa H3N2- och BY-stammar. Dessutom tog 1000 kDa-membransystemet mindre tid att koncentrera samma volym klarad lösning, vilket visar en fördel i termer av tidskostnad. Därför valdes 1000 kDa-membransystemet för ultrafiltreringskoncentrationen av influensaviruskoncentrat från influensa V-stammar.

 

Effekter av olika koncentrationsförhållanden på kvaliteten på klarad influensaviruslösning av typ IV

Koncentrationsfaktor är ett avgörande steg i reningen, nära relaterat till utbytet av målproteinet, koncentrationstiden och säkerheten i koncentrationssystemet. Ett 1000 kd membraninkapslingssystem valdes för ultrafiltreringskoncentrationsstudier . 60 L allantoisvätska från var och en av fyra influensavirustyper (UA1, UA3, UB1 och UB2) uppsamlades och utsattes för kontinuerlig flödescentrifugering och fler-klarning från varje klarad lösning för att erhålla 54 L. Varje klarad lösning delades in i nio grupper om 6 L vardera och koncentrationsfaktorer på 30, 40 och 50 undersöktes, med varje faktor som upprepades tre gånger för att verifiera repeterbarhet och stabilitet. Motsvarande slutvolymer var 0,2 L, 0,15 L respektive 0,12 L.

, togs prover för att testa den totala proteinhalten, den totala proteinavlägsningshastigheten, hemagglutinationstiter, koncentrationstiterutbyte och hemagglutininhalt. Testresultaten visas i figur 10-14 .

 

Figur 1.0 Resultat av koncentrationen av influensavirus serotyp 4 klarad lösning vid olika koncentrationsförhållanden - totalt proteininnehåll

Figur 1.1 Resultat av koncentrationen av den klarnade lösningen av influensavirus typ IV efter olika koncentrationsförhållanden - total proteinborttagningshastighet

Figur 12. Detektionsresultat av influensavirus serotyp IV klarad vätska efter koncentration vid olika koncentrationsförhållanden - hemagglutinationstiter

Figur 1.3 Resultat av koncentration av den klarnade lösningen av influensavirus av olika typer efter olika koncentrationsförhållanden - koncentrationstiter och utbyte

Figur 14. Detektionsresultat av hemagglutininhalt i den klarnade lösningen av influensavirus typ IV efter koncentration vid olika koncentrationsförhållanden.

 

Resultaten visade att för olika koncentrationsförhållanden indikerade lägre koncentrationsförhållanden lägre total proteinhalt och total proteinborttagningshastighet, såväl som lägre hemagglutinationstitrar, koncentrationstiterutbyten och hemagglutininhalt. Högre koncentrationsförhållanden kunde undvika dessa problem, men de ställde högre krav på systemet, ökade systemets driftstryck och potentiellt ökade förluster. Dessutom ledde det ökade trycket till längre produktionstider och därmed ökade tidskostnaderna. Med tanke på alla faktorer var ett koncentrationsförhållande på 30-40 gånger optimalt.

 

Effekten av olika reningsprocesser på kvaliteten på koncentrerat influensavirus av typ IV

Resultaten visade att Capto Core 700-rening gav högre totala protein- och ovalbuminavlägsnandehastigheter och lägre totalprotein- och ovalbuminhalt, men lägre hemagglutininhalt och -utbyte. Sackarosdensitetsgradientcentrifugering, å andra sidan, uppnådde högre hemagglutininhalt och utbyte. Dessutom var hemagglutininutbytet för Capto Core 700 konsekvent över 50 %, något lägre än för sackarosdensitetsgradientcentrifugering. Men med tanke på att sackarosdensitetsgradientcentrifugering kräver avsackarisering efter rening, är mer tidskrävande-och resulterar i större förluster, är Capto Core 700 den föredragna metoden. Reningsmetoden Core 700 är överlägsen som reningsmetod för koncentrerat influensavirus av typ IV.

Referenser: Huang, Zhentian. Optimering av nedströms produktionsprocess för kvadrivalent influensavirus delat vaccin [D]. Shenyang Agricultural University, 2024. DOI:10.27327/d.cnki.gshnu.2024.001595.